Která metoda je nejlepší?
—Testy na diagnostiku infekce SARS-CoV-2
U potvrzených případů COVID-19 hlášené běžné klinické příznaky zahrnují horečku, kašel, myalgii nebo únavu.Tyto příznaky však nejsou jedinečnými rysy COVID-19, protože tyto příznaky jsou podobné jako u jiných virem infikovaných onemocnění, jako je chřipka.V současné době jsou primárními nástroji pro klinickou diagnostiku infekce virová nukleová kyselina Real-Time PCR (rt-PCR), CT zobrazení a některé hematologické parametry.Mnoho laboratorních testovacích souprav bylo vyvinuto a používáno při testování vzorků pacientů na COVID-19 čínským CDC1, US CDC2a další soukromé společnosti.Test na protilátky IgG/IgM, sérologická testovací metoda, byl také přidán jako diagnostické kritérium do aktualizované verze pokynů pro diagnostiku a léčbu nového koronavirového onemocnění (COVID-19) v Číně, která byla vydána 3.1.Test virové nukleové kyseliny rt-PCR je stále současnou standardní diagnostickou metodou pro diagnostiku COVID-19.
StrongStep®Nový Coronavlrus (SARS-COV-2)Multiplex Real-Time PCR Kit (detekce tří genů)
Přesto tyto testovací sady pro PCR v reálném čase, které hledají genetický materiál viru, například v nosních, ústních nebo análních výtěrech, trpí mnoha omezeními:
1) Tyto testy mají dlouhé doby obratu a jsou komplikované v provozu;generování výsledků obvykle trvá v průměru přes 2 až 3 hodiny.
2) Testy PCR vyžadují certifikované laboratoře, drahé vybavení a vyškolené techniky.
3) Existuje určitý počet falešně negativních výsledků pro rt-PCR COVID-19.Může to být způsobeno nízkou virovou zátěží SARS-CoV-2 ve vzorku výtěru z horních cest dýchacích (nový koronavirus infikuje hlavně dolní dýchací cesty, jako jsou plicní alveoly) a test nedokáže identifikovat lidi, kteří prošli infekcí, uzdravili se a vyčistili virus z jejich těl.
Výzkum Lironga Zou a kol4zjistili, že vyšší virové zátěže byly zjištěny brzy po nástupu příznaků, přičemž vyšší virové zátěže byly zjištěny v nose než v krku a vzor vylučování virové nukleové kyseliny u pacientů infikovaných SARS-CoV-2 se podobá vzoru u pacientů s chřipkou4a zdá se odlišný od toho, který byl pozorován u pacientů infikovaných SARS-CoV-2.
Yang Pan a kol5zkoumali sériové vzorky (výtěry z krku, sputa, moč a stolici) od dvou pacientů v Pekingu a zjistili, že virová zátěž ve výtěrech z krku a vzorcích sputa dosáhla vrcholu přibližně 5–6 dnů po nástupu příznaků, vzorky sputa obecně vykazovaly vyšší virovou zátěž než vzorky výtěru z krku.Ve vzorcích moči nebo stolice od těchto dvou pacientů nebyla detekována žádná virová RNA.
PCR test dává pozitivní výsledek pouze tehdy, když je virus stále přítomen.Testy nemohou identifikovat lidi, kteří prošli infekcí, uzdravili se a odstranili virus ze svých těl.Ve skutečnosti bylo pouze asi 30–50 % pozitivních na PCR u pacientů s klinicky diagnostikovanou pneumonií způsobenou novým koronavirem.Mnoho nových pacientů s koronavirovou pneumonií nemůže být diagnostikováno kvůli negativnímu testu na nukleové kyseliny, takže nemohou dostat odpovídající léčbu včas.Od prvního do šestého vydání pokynů se spoléhalo pouze na diagnózu výsledků testů nukleových kyselin, což způsobilo lékařům velké potíže. Nejstarší „whistleblower“, Dr. Li Wenliang, oftalmolog z Wuhan Central Nemocnice je mrtvá.Během svého života měl tři testy nukleových kyselin v případě horečky a kašle a naposledy měl pozitivní výsledky PCR.
Po diskusi odborníků bylo rozhodnuto rozšířit metody testování séra jako nové diagnostické kritérium.Zatímco testy protilátek, nazývané také sérologické testy, mohou potvrdit, zda byl někdo infikován i poté, co jeho imunitní systém vyčistil virus, který způsobuje COVID-19.
Rychlý test protilátek StrongStep® SARS-COV-2 IgG/IgM
Test na protilátky IgG/IgM pomůže vysledovat mnohem více na populaci, kdo měl infekci, protože se zdá, že mnoho případů se šíří od asymptomatických pacientů, které nelze snadno identifikovat.Manželé v Singapuru, manžel byl pozitivně testován pomocí PCR, výsledek testu PCR jeho manželky byl negativní, ale výsledky testu na protilátky ukázaly, že má protilátky, stejně jako její manžel.
Sérologické testy musí být pečlivě validovány, aby bylo zajištěno, že reagují spolehlivě, ale pouze na protilátky proti novému viru.Jedna obava byla, že podobnost mezi viry, které způsobují těžký akutní respirační syndrom, a COVID-19 by mohla vést ke zkřížené reaktivitě.IgG-IgM vyvinutý Xue Feng wangem6bylo považováno za možné použít jako bod péče (POCT), protože jej lze provést v blízkosti lůžka s krví z prstu.Kit má senzitivitu 88,66 % a specificitu 90,63 %.Stále však existovaly falešně pozitivní a falešně negativní výsledky.
V čínské aktualizované verzi pokynů pro diagnostiku a léčbu nového koronavirového onemocnění (COVID-19)1potvrzené případy jsou definovány jako podezřelé případy, které splňují jedno z následujících kritérií:
(1) Vzorky z dýchacího traktu, vzorky krve nebo stolice byly pozitivně testovány na SARS-CoV-2 nukleovou kyselinu pomocí rt-PCR;
(2) Genetické sekvenování viru z respiračního traktu, vzorků krve nebo stolice je vysoce homologní se známým SARS-CoV-2;
(3) Sérové nové protilátky IgM specifické pro koronavirus a protilátky IgG byly pozitivní;
(4) Změna sérové nové protilátky IgG specifické pro koronavirus z negativní na pozitivní nebo protilátky IgG specifické pro koronavirus během období zotavení je 4krát vyšší než během akutního období.
Diagnostika a léčba COVID-19
| Směrnice | Publikováno | Potvrzená diagnostická kritéria |
| Verze 7 | 3. března 2020 | ❶ PCR ❷ NGS ❸ IgM+IgG |
| Verze 6 | 18. února 2020 | ❶ PCR ❷ NGS |
Odkaz
1. Pokyny pro diagnostiku a léčbu nové koronavirové pneumonie (zkušební verze 7, Národní zdravotní komise Čínské lidové republiky, vydaná 3. března 2020)
http://www.nhc.gov.cn/yzygj/s7652m/202003/a31191442e29474b98bfed5579d5af95.shtml
2. Pro identifikaci 2019-nCoV používejte pouze protokol Real-Time RT-PCR
https://www.cdc.gov/coronavirus/2019-ncov/lab/rt-pcr-detection-instructions.html
3. Singapur požaduje první použití testu na protilátky ke sledování infekcí koronavirem
https://www.sciencemag.org/news/2020/02/singapore-claims-first-use-antibody-test-track-coronavirus-infections
4. Virové zatížení SARS-CoV-2 ve vzorcích horních cest dýchacích infikovaných pacientů 19. února 2020 DOI: 10.1056/NEJMc2001737
5. Virové zátěže SARS-CoV-2 v klinických vzorcích Lancet Infect Dis 2020 Publikováno online 24. února 2020 (https://doi.org/10.1016/S1473-3099(20)30113-4)
6. Vývoj a klinická aplikace rychlého testu kombinované protilátky IgM-IgG na SARS-CoV-2
Diagnóza infekce XueFeng Wang ORCID iD: 0000-0001-8854-275X
Čas odeslání: 17. března 2020
