Jeden svět jeden boj
„Internační spolupráce při vybudování globálního společenství společného osudu reagující na pandemické výzvy Covid-19
Román Coronavirus zametající po celém světě vyústil v probíhající globální pandemickou krizi Covid-19. Román Coronavirus nemá hranice, z této bitvy proti Covid-19 nebude ušetřena žádná země. V reakci na tuto celosvětovou pandemii Covid-19, Liming Bio-Products Corp přispívá k podpoře blahobytu našich globálních komunit.
Náš svět v současné době čelí bezprecedentnímu dopadu pandemie románu Coronavirus 2019 (Covid-19). K dnešnímu dni není k dispozici žádná účinná léčiva pro léčbu tohoto onemocnění. Pro detekci CoVID-19 však bylo vyvinuto mnoho diagnostických testů. Tyto testy jsou založeny na molekulárních nebo sérologických metodách k detekci nových biomarkerů nukleové kyseliny nebo protilátky specifické pro koronavirus. Protože Covid-19 dosáhl pandemického stavu, včasná diagnóza nové infekce koronaviru je rozhodující při hodnocení šíření viru a jeho obsahu, ale dokonalý test pro univerzální použití dosud neexistuje. Musíme vědět, jaké testy by mohly být potenciálně použity pro screening, diagnózu a monitorování infekce Covid-19 a jaké jsou jejich omezení. Je velmi důležité, jak lépe využívat tyto vědecké nástroje a pomáhat identifikovat a řídit vznik této rychle se šířící a vážné nemoci.
Účelem detekce nového koronaviru je zjistit, zda jednotlivec, který má infekci CoVID-19 nebo asymptotický nosič, který může virus tiše šířit, aby poskytl základní informace pro vedení rozhodování o klinické léčbě. Předchozí studie ukázaly, že 70% klinických rozhodnutí závisí na výsledcích testování. Pokud jsou použity různé metody detekce, požadavky na sady detekčních činidel se také liší.
Obrázek 1
Obrázek 1:Schéma ukazující klíčové fáze hladin obecných biomarkerů během typického časového průběhu infekce CoVID-19. Osa x označuje počet dnů infekce a osa y ukazuje virovou zátěž, koncentraci antigenů a koncentraci protilátek v různých obdobích. Protilátka odkazuje na protilátky IgM a IgG. Detekce RT-PCR i antigen se používají k detekci přítomnosti nebo nepřítomnosti nového koronaviru, což je přímým důkazem pro včasnou detekci pacientů. Během týdne virové infekce je preferována detekce PCR nebo detekce antigenu. Po nové infekci Coronavirus po dobu asi 7 dnů se IGM protilátka proti novému koronaviru postupně zvyšovala v krvi pacienta, ale doba trvání existence je krátká a její koncentrace rychle klesá. Naproti tomu se protilátka IgG proti viru objeví později, obvykle asi 14 dní po virové infekci. Koncentrace IgG se postupně zvyšuje a přetrvává dlouhou dobu v krvi. Pokud je tedy IgM detekován v krvi pacienta, znamená to, že virus nedávno infikoval, což je marker včasné infekce. Když je protilátka IgG detekována v krvi pacienta, znamená to, že virová infekce byla již nějakou dobu. To se také nazývá pozdní infekce nebo předchozí infekce. To je často vidět u pacientů, kteří jsou ve fázi zotavení.
Biomarkery románu koronaviru
Nový koronavirus je virus RNA, který se skládá z proteinů a nukleových kyselin. Virus napadne hostitelské (lidské) tělo, vstupuje do buněk prostřednictvím vazebného místa odpovídajícího receptoru ACE2 a replikuje v hostitelských buňkách, což způsobuje, že lidský imunitní systém reaguje na zahraniční útočníky a produkuje specifické protilátky. Proto jsou lahické nukleové kyseliny a antigeny a specifické protilátky proti novému koronaviru teoreticky použity jako specifické biomarkery pro detekci nového koronaviru. Pro detekci nukleových kyselin se technologie RT-PCR nejčastěji používá, zatímco sérologické metody se běžně používají pro detekci nových protilátek specifických pro koronavirus. V současné době existuje celá řada testovacích metod, které si můžeme vybrat pro testování infekce COVID-19 [1].
Základní principy hlavních testovacích metod pro nový koronavirus
Dosud je k dispozici mnoho diagnostických testů pro COVID_19, přičemž více testovacích souprav dostává schválení na základě povolení k nouzovému použití každý den. Ačkoli nový vývoj testů vychází s tolika různými jmény a formáty, všechny současné testy COVID_19 se v zásadě spoléhají na dvě hlavní technologie: detekce nukleových kyselin pro virovou RNA a sérologické imunoanalýzy, které detekují virově specifické protilátky (IGM a IgG).
01. Detekce nukleových kyselin
Reverzní transkripční polymerázová řetězová reakce (RT-PCR), izotermální amplifikace zprostředkovaná smyčkou (LAMP) a sekvenování nové generace (NGS) jsou běžné metody nukleové kyseliny pro detekci nové koronavirové RNA. RT-PCR je prvním typem testu na CoVID-19, doporučený Světovou zdravotnickou organizací (WHO) a americkým centrem pro kontrolu a prevenci nemocí (CDC).
02.Serologická detekce protilátek
Protilátka je ochranný protein produkovaný v lidském těle v reakci na infekci viru. IgM je časný typ protilátky, zatímco IgG je pozdější typová protilátka. Vzorek séra nebo plazmy je obvykle zkoumán na přítomnost specifických typů IgM a IgG protilátky pro posouzení akutní a rekonvalescentní fáze infekce CoVID-19. Tyto metody detekce založené na protilátkách zahrnují imunochromatografický test koloidního zlata, imunochromatografie na latexu nebo fluorescenční mikrosférické imunochromatografii, imunosorbentní test spojený s enzymem (ELISA) a test chemiluminiscence.
03. Detekce ovirového antigenu
Antigen je struktura na viru rozpoznaném lidským tělem, který spouští imunitní obrannou systém k produkci protilátek, aby vyčistil virus z krve a tkání. Virový antigen přítomný na viru může být zacílen a detekován pomocí imunoanalýzy. Stejně jako virová RNA jsou virové antigeny přítomny také v respiračním traktu infikovaných jedinců a lze je použít k diagnostice akutní fáze infekce Covid-19. Proto se často doporučuje shromažďovat vzorky horních cest dýchacích, jako jsou sliny, nosofaryngeální a orofaryngeální výtěry, hluboký kašel sputum, bronchoalveolární tekutina (BALF) pro počáteční testování antigenu.
Výběr testovacích metod pro nový koronavirus
Výběr metody testování zahrnuje mnoho faktorů, včetně klinického nastavení, kontroly kvality testování, doby obratu, nákladů na testování, metody výběru vzorků, technických požadavků na laboratorní personál, požadavky na zařízení a vybavení. Detekce nukleových kyselin nebo virových antigenů je poskytnout přímý důkaz o přítomnosti virů a potvrdit diagnózu nové koronavirové infekce. Ačkoli existuje mnoho metod pro detekci antigenu, jejich detekční citlivost nového koronaviru je teoreticky nižší než citlivost amplifikace RT-PCR. Testování protilátek je detekce antivirových protilátek produkovaných v lidském těle, které v čase zaostává a často nelze použít pro včasnou detekci během akutní fáze infekce viru. Klinické nastavení pro detekční aplikace se může lišit a místa sběru vzorků se mohou také lišit. Pro detekci virových nukleových kyselin a antigenů musí být vzorek shromážděn v respiračním traktu, kde je virus přítomen, jako jsou nosofaryngeální výtěry, orofaryngeální výtěry, sputum nebo bronchoalveolární výplachová tekutina (BALF). Pro detekci založené na protilátkách je třeba se shromáždit a zkoumat a zkoumán na přítomnost specifické antivirové protilátky (IgM/IgG). Výsledky testu protilátky a nukleové kyseliny se však mohou navzájem doplňovat. Například když je výsledkem testování nukleovou kyselinou negativní, IgM-negativní, ale IgG-pozitivní, tyto výsledky naznačují, že pacient v současné době nese virus, ale byl získán z nové infekce koronaviru. [2]
Výhody a nevýhody nových testů koronaviru
V protokolu diagnostiky a léčby pro novou pneumonii Coronavirus (Trial version7) (vydaná Národní zdravotní komisí a státní správa tradiční čínské medicíny 3. března 2020) se testování nukleových kyselin používá jako metoda zlaté standardy pro diagnostiku románu Infekce koronaviru, zatímco testování protilátek je také považováno za jednu z potvrzovacích metod pro diagnózu.
Patogenní a sérologické nálezy
(1) Patogenní nálezy: Nová koronavirová nukleová kyselina může být detekována v nosofaryngeálních výtěrech, sputum, sekreci dolních dýchacích cest, krví, výkaly a dalších vzorků pomocí metod RT-PCRAND/nebo NGS. Je přesnější, pokud jsou vzorky získány z dolních dýchacích cest (extrakce sputa nebo vzduchového traktu). Vzorky by měly být předloženy k testování co nejdříve po sběru.
(2) sérologické nálezy: IgM specifický pro virus NCP se detekovatelný kolem 3-5 dnů po nástupu; IgG dosahuje titraci alespoň čtyřnásobného zvýšení během rekonvalescence ve srovnání s akutní fází.
Výběr metod testování však závisí na geografických umístěních, lékařských předpisech a klinických prostředích. V USA vydala NIH pokyny pro léčbu koronaviru 2019 (Covid-19) (aktualizováno na místě: 21,2020) a FDA vydaly politiku pro diagnostické testy na chorobu koronaviru-2019 během nouze veřejného zdraví (vydáno 16. března 20202020 ), ve kterém sérologické testování protilátek IgM/IgG vybralo pouze jako screeningový test.
Metoda detekce nukleových kyselin
RT_PCR je vysoce citlivý test nukleové kyseliny navržený k detekci, zda je v respiračním nebo jiném vzorku přítomna nová koronavirová RNA. Pozitivní výsledek testu PCR znamená přítomnost nové koronavirové RNA ve vzorku, aby se potvrdila infekce CoVID-19. Negativní výsledek testu PCR neznamená nepřítomnost infekce viru, protože by mohl být ovlivněn špatnou kvalitou vzorku nebo časovým bodem nemoci v obnovené fázi atd. Ačkoli RT-PCR je vysoce citlivý test, má několik nevýhod. RT-PCR testy mohou být náročné na práci a časově náročné, což je zásadní závislé na vysoké kvalitě vzorku. To může být výzva, protože množství virové RNA se nejen mění mezi různými pacienty, ale také se může lišit v rámci stejného pacienta v závislosti na časových bodech, kdy se vzorek shromažďuje, jakož i na fázích infekce nebo nástupu klinických symptomů. Detekce nového koronaviru vyžaduje vysoce kvalitní vzorky, které obsahují dostatečné množství neporušené virové RNA.
Test RT-PCR může u některých pacientů, kteří mají infekci CoVID-19, poskytnout nesprávný negativní výsledek (falešně negativní). Jak víme, hlavní místa infekce románu koronaviru se nachází v plicích a dolním dýchacích cestách, jako jsou alveoly a bronchi. Proto vzorek sputa z hlubokého kašle nebo bronchoalveolární tekutiny (BALF) považován za nejvyšší citlivost pro detekci viru. V klinické praxi se však vzorky často shromažďují z horních cest dýchacích pomocí nosofaryngeálních nebo orofaryngeálních výtěrů. Shromažďování těchto exemplářů je nejen nepříjemné pro pacienty, ale také vyžaduje speciálně vyškolený personál. Aby se vzorkoval méně invazivní nebo snazší, v některých případech mohou být pacienti podávány perorální tampon a umožnit jim vzít vzorek z bukální sliznice nebo jazyka, který se sám otřes. Bez dostatečné virové RNA může RT-QPCR vrátit výsledek falešně negativního testu. V provincii Hubei v Číně byla hlášena citlivost RT-PCR v počáteční detekci pouze asi 30%-50%, v průměru 40%. Vysoká míra falešně negativní byla pravděpodobně způsobena nedostatečným odběrem vzorků.
Kromě toho test RT-PCR vyžaduje, aby vysoce vyškolený personál prováděl složité kroky extrakce RNA a postupu amplifikace PCR. Vyžaduje také vyšší úroveň ochrany biologické bezpečnosti, zvláštního laboratorního zařízení a přístroje PCR v reálném čase. V Číně je třeba provést test RT-PCR pro detekci COVID-19 v laboratořích biologické bezpečnosti 2 (BSL-2), přičemž ochrana personálu pomocí praxe úrovně 3 (BSL-3). Podle těchto požadavků byla od začátku ledna do začátku února 2020 kapacita CDC laboratoře Wuhan Wuhan schopna detekovat pouze několik stovek případů denně. Normálně by to nebyl problém při testování jiných infekčních chorob. Při jednání s globální pandemií, jako je Covid-19 s potenciálně miliony lidí, které mají být testovány, se RT-PCR stává kritickým problémem kvůli požadavkům na zvláštní laboratorní zařízení nebo technické vybavení. Tyto nevýhody mohou omezit RT-PCR, která se má použít jako efektivní nástroj pro screening, a může také vést ke zpoždění ve zprávách o výsledcích testování.
Metoda detekce sérologické protilátky
S postupem průběhu nemoci, zejména ve středních a pozdních stádiích, je rychlost detekce protilátek velmi vysoká. Studie ve Wuhan Central South Hospital ukázala, že míra detekce protilátek by mohla dosáhnout více než 90% ve třetím týdnu infekce Covid-19. Protilátka je také produktem lidské imunitní odpovědi proti novému koronaviru. Test protilátek nabízí několik výhod oproti RT-PCR. Za prvé, sérologická protilátka testuje jednoduché a rychlé. Protilátkové testy laterálního toku mohou být použity pro point-of-care k dosažení výsledku za 15 minut. Za druhé, cíl detekovaný sérologickým testem je protilátka, o níž je známo, že je mnohem stabilnější než virová RNA. Během sběru, transportu, skladování a testování jsou vzorky pro testy protilátek obecně stabilnější než vzorky pro RT-PCR. Zatřetí, protože protilátka je rovnoměrně distribuována v krevním oběhu, ve srovnání s testem nukleové kyseliny je menší změna vzorkování. Objem vzorku požadovaný pro test protilátky je relativně malý. Například 10 mikrolitrů krve prstu krve je dostatečný pro použití v testu laterálního toku protilátky.
Obecně je test protilátek vybrán jako nástroj doplňku pro detekci nukleových kyselin ke zlepšení rychlosti detekce nového koronaviru během kurzů nemoci. Když se test protilátky používá společně s testem nukleové kyseliny, může zvýšit přesnost testu pro diagnózu CoVID19 snížením potenciálních falešně pozitivních a falešně negativních výsledků. Aktuální provozní příručka nedoporučuje používat dva typy testů samostatně jako nezávislý detekční formát, ale měl by být použit jako kombinovaný formát. [2]
Obrázek 2:Správná interpretace výsledků testu nukleové kyseliny a protilátky pro detekci nové infekce koronavirus
Obrázek 3:Liming Bio-Products Co., Ltd.-Nový koronavirus IgM/IgG protilátkový testovací souprava (Strongstep®Rychlý test protilátky SARS-CoV-2 IgM/IgG, latexová imunochromatografie)
Obrázek 4:Liming Bio-Products Co., Ltd.-Strongstep®Nová souprava PCR v reálném čase v reálném čase (SARS-CoV-2) (detekce pro tři geny, metoda fluorescenční sondy).
Poznámka:Tato vysoce citlivá sada PCR připravená k použití je k dispozici v lyofilizovaném formátu (proces břicha) pro dlouhodobé skladování. Sada může být přepravována a uložena při pokojové teplotě a je stabilní po dobu jednoho roku. Každá trubice Premixu obsahuje všechna činidla potřebná pro amplifikaci PCR, včetně reverzní transcriptázy, taq polymerázy, primerů, sond a substrátů DNTPS. Uživatelé mohou jednoduše rekonstitutovat přidáním vody PCR-třídy spolu se šablonou a poté načíst na přístroj PCR pro spuštění zesílení.
V reakci na nové vypuknutí koronaviru, Liming Bio-Products Co., Ltd. rychle pracoval na vývoji dvou diagnostických souprav, aby umožnily klinické a veřejné zdraví laboratoře pro rychlou diagnostiku infekce COVID-19. Tyto soupravy jsou velmi vhodné pro použití pro rozsáhlé screening v zemích a regionech, kde se nové ohnisko koronaviru rychle šíří a pro poskytování diagnózy a potvrzení pro infekci COVID-19. Tyto soupravy jsou určeny pouze v rámci předem neotetifikované autorizace nouzového použití (PEUA). Testování je omezeno na laboratoře certifikované podle předpisů národních nebo místních úřadů.
Metoda detekce antigenu
1. Detekce virového antigenu je klasifikována ve stejné kategorii přímé detekce jako detekce nukleových kyselin. Tyto metody přímé detekce hledají důkaz virových patogenů ve vzorku a lze je použít pro potvrzovací diagnózu. Vývoj detekčních souprav antigenu však vyžaduje vysokou kvalitu monoklonálních protilátek se silnou afinitou a vysokou citlivostí schopnou rozpoznat a zachytit patogenní viry. Výběr a optimalizaci monoklonální protilátky vhodné pro použití při přípravě soupravy detekce antigenu obvykle trvá více než šest měsíců.
2. v současné době jsou činidla pro přímou detekci nového koronaviru stále ve fázi výzkumu a vývoje. Proto nebyla klinicky ověřena a komerčně dostupná sada pro detekci antigenu. Ačkoli bylo dříve hlášeno, že diagnostická firma v Shenzhenu vyvinula soupravu detekce antigenu a klinicky testovanou ve Španělsku, spolehlivost a přesnost testu nemohla být ověřena kvůli přítomnosti problémů s kvalitou činidla. K dnešnímu dni NMPA (bývalá Čína FDA) dosud neschválila žádnou sadu detekce antigenu pro klinické použití. Závěrem byla vyvinuta řada metod detekce. Každá metoda má své výhody a omezení. Výsledky různých metod lze použít pro ověření a doplňky.
3. produkce kvalitní testovací soupravy Covid-19 silně závisí na optimalizaci během výzkumu a vývoje. Liming Bio-Product Co., Ltd. Testovací sady jsou vyžadovány pro splnění přísných standardů výroby a kontroly kvality, aby se zajistilo, že poskytují nejvyšší úroveň výkonu a konzistence. Vědci společnosti Liming Bio-Product Co., Ltd. mají více než dvacet let zkušeností s navrhováním, testováním a optimalizací diagnostických souprav in vitro, aby byla zajištěna nejvyšší úroveň výkonu v analytické kvantifikaci.
Během pandemie Covid-19 čelila čínská vláda nárůstu obrovské poptávky po epidemických preventivních materiálech v mezinárodních hotspotech. 5. dubna na tiskové konferenci Státní rady Mechanism pro prevenci a kontrolu společných předcházení státní rady „Posílení řízení kvality lékařských materiálů a regulace pořadí trhu“, fanoušek Jiang, inspektor první úrovně ministerstva zahraničního obchodu ministerstva Obchod, řekl: „Dále zaměříme své úsilí na dva aspekty, nejprve urychlíme podporu více zdravotnických potřeb potřebných mezinárodním společenstvím a také ke zlepšení kontroly kvality, regulace a řízení produktů. Přispíváme čínským příspěvkem ke společné reakci na globální epidemii a budování komunity se sdílenou budoucností pro lidstvo.
Obrázek 5:Liming Bio-Products Co., románového koronavirového činidla Ltd.
Čestný osvědčení
Houshenshan
Obrázek 6. Liming Bio-Products Co., Ltd. podporoval horskou nemocnici Wuhan Vulcan (Houshenshan), aby bojoval proti epidemii Covid-19 a získal čestné osvědčení o Wuhan Red Cross. Mountain Hospital Wuhan Vulcan je nejslavnější nemocnicí v Číně, která se specializuje na léčbu těžkých Covid - 19 pacientů.
Vzhledem k tomu, že se román Koronavirus pokračuje v šíření po celém světě, Nanjing Liming Bio-Products Co., Ltd. zvyšuje podporu a pomoc komunitám po celém světě s našimi inovativními technologiemi v boji proti této bezprecedentní globální hrozbě. Rychlé testování infekce COVID-19 je kritickou součástí řešení této hrozby. Nadále významně přispíváme tím, že poskytujeme vysoce kvalitní diagnostické platformy do rukou pracovníků v první linii, aby lidé mohli získat výsledky kritických testování, které potřebují. Liming Bio-Products Co., úsilí Ltd. v bitvě proti Pandemii Covid-19 má přispívat našimi technologiemi, zkušenostmi a odborností mezinárodním komunitám pro výstavbu globálního společenství osudu.
Dlouhý stiskněte ~ Skenování a sledujte nás
E-mail: sales@limingbio.com
Web: https://limingbio.com
Čas příspěvku: květen-01.-20.2020
